水泥地面：350mL/m2，土质地面，1000mL/m2），作用30分钟以上；对肝炎病毒和结核杆菌污染的表面的消毒，用含有效氯2000mg/L的消毒液均匀喷洒（喷洒　量同前），作用60分钟以上。④ 干粉消毒法：对排泄物的消毒，用漂白粉等粉剂含氯消毒剂按排泄物的1/5用量加入排泄物中，略加搅拌后，作用2-6小时，　对医院污水的消毒，用干粉按有效氯50mg/L用量加入污水中并搅拌均匀，作用2小时后排放。⑤ 影响杀菌因素A 浓度与作用时间 一般规律是药物浓度愈高，作用时间愈久，杀菌效果愈好。但漂白粉与三合二药物浓度增高，其溶液pH值亦随之上升，有时反需延长作用时间才能灭菌；B酸碱度 pH值愈低，杀菌作用愈强。含氯消毒剂的杀菌作用主要依赖于溶液中未分解的次氯酸浓度，而溶液pH值愈低，则未分解的次氯酸愈多，随着pH值上升，愈来愈多的次氯酸分解成氢与次氯酸根离子，而失去杀菌作用；

在巴斯德微生物研究基础上更进一步的约瑟夫·李斯特（1827-1912），是英国维多利亚时代的外科医师，也是外科消毒法的创始人及推广者。在他那个年代，医学界普遍缺乏消毒意识，使得当时外科手术的成功率不高，无法得到普遍实行。但是，李斯特经过观察发现，皮肤完好的骨折病人一般不易发生感染，便提出设想，即感染是因为外部因素造成的。18 ** 年4月7日，巴斯德发现微生物的存在，为李斯特的设想提供了理论上的依据。1865年，当时他在格拉斯哥大学担任外科医学教授，首先提出缺乏消毒是手术后发生感染的主要原因。1867年他发表论文公布了这一成果，不到10年就使手术后死亡率从45 %降到 15 %。挽救了亿万人的生命。而其论文中有关外科无菌操作技术的论述，其中大部分原则仍沿用至今。

20世纪30年代，甲醛的应用在化学消毒发展史上建立了一个里程碑，因此甲醛被誉为第一代化学灭菌剂。醇类也是发现比较早的一类化学消毒剂，如今我们在医院中与生活中常用的酒精消毒，主要成分就是乙醇。1949年，美国菲利普、史密斯等人研究了多种化合物的杀菌作用，发现了环氧乙烷，并且研究了其灭菌条件及影响因素。环氧乙烷被誉为第二代化学灭菌剂。1954年，戴维斯研制成氯己定（洗必泰），它虽然是一种低效消毒剂，但其消毒效果已被公认。 1962年，美国的派普筛选了醛类化合物，发现了戊二醛一经碱化便有良好的杀芽孢作用。此后，一些学者研究了戊二醛的应用条件，杀菌作用及影响因素。这种消毒剂具有广谱、高效、气味小、低毒、对金属腐蚀小的优点。20世纪70年代以来广泛应用于医学灭菌，被称为冷灭菌剂，并被称为第三代化学灭菌剂。