与此同时，物理学与化学新技术的发展为消毒方法的更新提供了有利条件。近30年来，随着物理学新技术开发，物理消毒技术有很大发展。电离辐射自1953年用于医疗器材的灭菌以来，由于辐射灭菌不使物品升温、穿透力强、方法简便且节约能源消耗，使用频率越来越高。预真空压力蒸汽灭菌器在实践中解决了压力蒸汽灭菌器中冷空气排除的问题，其蒸汽对被消毒物品的穿透快速，灭菌快，极大程度节约了人力、时间和能源。此外，微波消毒也是物理学技术开发、应用的成果。微波可穿透玻璃、陶瓷、塑料及纸张，热传导迅速均匀，物品可以在用上述材料包装密封以后进行灭菌。

在巴斯德微生物研究基础上更进一步的约瑟夫·李斯特（1827-1912），是英国维多利亚时代的外科医师，也是外科消毒法的创始人及推广者。在他那个年代，医学界普遍缺乏消毒意识，使得当时外科手术的成功率不高，无法得到普遍实行。但是，李斯特经过观察发现，皮肤完好的骨折病人一般不易发生感染，便提出设想，即感染是因为外部因素造成的。18 ** 年4月7日，巴斯德发现微生物的存在，为李斯特的设想提供了理论上的依据。1865年，当时他在格拉斯哥大学担任外科医学教授，首先提出缺乏消毒是手术后发生感染的主要原因。1867年他发表论文公布了这一成果，不到10年就使手术后死亡率从45 %降到 15 %。挽救了亿万人的生命。而其论文中有关外科无菌操作技术的论述，其中大部分原则仍沿用至今。

20世纪30年代，甲醛的应用在化学消毒发展史上建立了一个里程碑，因此甲醛被誉为第一代化学灭菌剂。醇类也是发现比较早的一类化学消毒剂，如今我们在医院中与生活中常用的酒精消毒，主要成分就是乙醇。1949年，美国菲利普、史密斯等人研究了多种化合物的杀菌作用，发现了环氧乙烷，并且研究了其灭菌条件及影响因素。环氧乙烷被誉为第二代化学灭菌剂。1954年，戴维斯研制成氯己定（洗必泰），它虽然是一种低效消毒剂，但其消毒效果已被公认。 1962年，美国的派普筛选了醛类化合物，发现了戊二醛一经碱化便有良好的杀芽孢作用。此后，一些学者研究了戊二醛的应用条件，杀菌作用及影响因素。这种消毒剂具有广谱、高效、气味小、低毒、对金属腐蚀小的优点。20世纪70年代以来广泛应用于医学灭菌，被称为冷灭菌剂，并被称为第三代化学灭菌剂。