2切片厚度50~100nm为宜:太薄反差低;太厚反差好,但结构重叠,电子束不能穿透;,3切片应耐电子束的强烈照射,不变形不升华;,4切片能够适当被染色,保证一定的反差;,5切片均匀,无影响拍照的皱褶、刀痕或染色污染,其中,DigitalMicrograph不仅能够自动识别Gatan公司电镜拍摄的dm3、dm4、Tif文件中的标尺、放大倍数、仪器型号等信息,还能够对图片中进行上伪色突出对比度、选区傅里叶变换、划线取向灰度分析等。
锇酸是强氧化剂,固定脂类、膜结构,有电子染色作用,3脱水,用适当的有机溶剂取代组织和细胞中的游离态水分,使之能与包埋剂混合,脱水要彻底,更换液体动作要迅速,脱水时间不宜过长,且固定后的样品要充分漂洗,4渗透、包埋与聚合,4,1渗透,2包埋与聚合,加温在60℃聚合形成固体基质,牢固地支撑整个细胞结构或组织,制成适于机械切割的固体树脂包埋块,利于切片,常用玻璃刀、钻石刀进行超薄切片,刀上要装水槽,并注入槽液。
染色方法有单染,包括铅盐单染和铀盐单染;双染色,醋酸铀染色和柠檬酸铅染色,双染色呈现结果更全面,我们一般采用的双染法进行染色,常用染色剂:醋酸铀,有微弱的放射性,主要染核酸、核蛋白、细胞核、结缔组织,柠檬酸铅,主要染膜结构、脂类、糖原等,易与CO2反应成沉淀,染色中应采取措施避免,电镜照片主要解析粒径分布、单晶/多晶、晶面结构、元素和原子分散,其本质是信号的空间分布,基本机理与比例尺地图是一致的。